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生物顯微鏡的成像原理（二）
三、顯微鏡照明系統(tǒng)
為了獲得良好的工作效果，生物顯微鏡必須注意照明的正確使用。生物顯微鏡的照明方式按其用途可以分成3類。
1．用透射光照明。在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)檢驗(yàn)上用的zui多zui廣，一般在數(shù)值孔徑小的低倍物鏡，可采用一種zui簡(jiǎn)單的照明器，用一凹面鏡（或平面鏡），使白然光經(jīng)凹面鏡后被會(huì)聚在載物片的樣品上。對(duì)于高倍鏡或油浸物鏡，必須采用專門的聚光器，位寬大的平行光束經(jīng)集光鏡后被會(huì)聚成與物鏡孔徑相適應(yīng)的錐形光束，方能滿足物鏡分辨本領(lǐng)的需要。而另一方面也增加了樣品的亮度。采用透射光照明，還有兩種方法，一種是將光線聚焦在標(biāo)本上，稱作臨界照明，如果光源表面亮度不均勻．則在載物片上也反映出來，如燈絲像等。在微型顯微鏡中，為了消除這一缺點(diǎn)，在案光器下面的藍(lán)色濾光片的一面．采用磨砂而減少僚的亮度不均勻現(xiàn)象。另一種方法叫庫勒照明，如圖3—3所示。由光源發(fā)出的光先經(jīng)過毛玻璃L，再經(jīng)過透鏡K把毛玻璃的像里在案光器下部的光欄J2處，集光器把光欄J1的像呈在物面上，并且把J2像呈在無限遠(yuǎn)，這種照明，即使光源本身亮度不均勻，而在標(biāo)本上的照明也是十分均勻的。而且調(diào)整好J1的孔徑，還可以減少雜散光的影響。
2。用于非透明體的照明。對(duì)于非透明體光線不能透射，這時(shí)只能從側(cè)面斜射照亮標(biāo)本，如圖3—4所示。當(dāng)用低倍物鏡時(shí)，有一定的工作距離，可以從上邊或旁邊照射被觀察物的表面，使漫射光進(jìn)入物鏡，這時(shí)不能用蓋玻片，否則規(guī)則的反射光將進(jìn)入物鏡影響觀察。因?yàn)槭菃蜗騻?cè)面照明，這樣被觀察的標(biāo)本可能有些變形。為了糾正這一缺點(diǎn)，還可以把物鏡放在環(huán)形光束中，采用全向照明。
3．用暗視場(chǎng)觀察微粒的照明。在通常的阿貝集光器下面，加一個(gè)環(huán)形光闌，將中間光線遮?。畠H使邊緣光線進(jìn)入集光，由于光線沒有直接進(jìn)入物鏡，因此視場(chǎng)背景是暗的，可以做暗視場(chǎng)的透明體觀察。這種照明對(duì)于線形或點(diǎn)形，細(xì)微結(jié)構(gòu)透明體觀察．如矽藻完皮、動(dòng)植物的各種組織、血液和含有細(xì)菌的液體等有較好的效果，如圖3—5所示。
應(yīng)用暗視場(chǎng)集光器來觀察標(biāo)本，必須在夜間或暗室中進(jìn)行，光源越強(qiáng)越好。用陽光直射、弧光燈或500支光電燈都行，但須使光線平行地射到反光鏡上。這可在光源與顯微鏡之間安插一塊凸透鏡，或用500mL燒瓶盛10％硫酸飼溶液，將光源剛好放在焦點(diǎn)處即可。所用的接物鏡的鏡口率只宜在1.0左右，太高則看不清物像。新式接物鏡管內(nèi)多安裝有小型光闌，可以隨意改變鏡口率的大小。
用普通生物顯微鏡也可以得到暗視場(chǎng)的效果：即將集光器卸下，并且把反光鏡盡量歪在一邊使反射后的光線不能直接射人接物鏡，則可得到相類似的結(jié)果。此種方法所得的光線僅只能從某一方面照射，如圖3—6所示。所以效果較差，而且只能在低倍鏡中使用，在高倍鏡和油浸系使用效果都不好。
如想光線能從各方面照射，而—時(shí)又無暗視物集光器，則可將普通明視場(chǎng)集光器稍加改變即可。即在集光鏡下面加一黑色之光擋，把來自反光鏡的光柱的中央部分遮掉，允許邊緣簡(jiǎn)狀光線進(jìn)入集光鏡。所遮掉的光的面積應(yīng)等于接物鏡的鏡口率，只有這樣才不致有光線直接射入接物鏡，如圖3—7所示。圖中，斜線表示直穿的光線，虛線表示反射的光線。另外一個(gè)方法就是將集光鏡上面一個(gè)透鏡的下面中央部用黑漆涂掉或剪一塊圓形黑色紙粘住即可，面積大小也應(yīng)剛好等于接物鏡的鏡口率，這和用遮光板的作用是一樣的。另外在接物鏡上組透鏡的上面，用適當(dāng)大小的黑紙片遮去中心部的光線，或是在眼點(diǎn)處設(shè)法遮掉中心部光線．然后用光鬧遮掉四周光線，也可得到較好的效果。要想得到良好的暗視場(chǎng)觀察．必須配備整套暗視場(chǎng)裝量為*。
四、生物顯微鏡的蓋玻片及載玻片
在360—780mm的光譜范圍內(nèi)，其光吸收應(yīng)為zui小。在正常目視觀察下，不應(yīng)有任何斑點(diǎn)、氣泡、條紋和夾雜物。此外，應(yīng)消除應(yīng)力，無放射背景熒光。
就其化學(xué)穩(wěn)定性而言，對(duì)正常用于顯微術(shù)中的浸液、溶劑、標(biāo)本等，必須是化學(xué)惰性。
蓋玻片在光學(xué)設(shè)計(jì)時(shí)常作為物鏡的一部分，和物鏡一起消像差，因此其材料和厚度必須加以規(guī)定。
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