徠卡共聚焦顯微鏡中細(xì)胞生物學(xué)功能

1．粘附細(xì)胞的分選：Meridian公司生產(chǎn)的ultMa型徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡成侶儀是目前世界上*能對粘附細(xì)胞進行分選的儀器，而這種不改變細(xì)胞周圍培養(yǎng)環(huán)境、細(xì)胞鋪展程度相生長狀態(tài)的分選方式是至關(guān)重要的。它有兩種方式：一種是燦1ahon方式，另一種是CookieCM小。8方式。

AN川on方式原理是；在特制的培養(yǎng)皿上有兩類細(xì)胞，一類是未作熒光染色的細(xì)胞群，另一類是作熒光染色的細(xì)胞群，利用高能激光把染色的細(xì)胞群殺死，而把末染色的細(xì)胞群保留并且繼續(xù)培養(yǎng)．這種方式適用于數(shù)量較多細(xì)胞的分選。

Co‘，k；eCMuinR方式原理是：利用高能量激光：F底部帶膜的特制培養(yǎng)皿上在欲選細(xì)胞周圍切割成八角形，而非選細(xì)胞則因在該幾何形狀之外而被除去，它適用于選擇數(shù)量較少的突變細(xì)胞、轉(zhuǎn)移細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞。

基于這兩種方法，徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡能夠做到：⑦總體掃描細(xì)胞群；⑦根據(jù)細(xì)胞

物理和少化特性進行分選；②對以百力分之‘機率發(fā)生的突變細(xì)胞進行篩選；①不改變

細(xì)胞形態(tài)、類型和活性而克隆細(xì)胞；、員分離細(xì)胞亞群以進行定量熒光分析；⑥自動儲分細(xì)胞位迎，以對待定細(xì)胞進行重復(fù)測定。

2．激光細(xì)胞顯微外科及光陷阱技術(shù)：激光掃描共聚焦顯微鏡可將激光作“光子刀”使用，以完成細(xì)腦膜瞬間穿孔，線粒體、溶酶體等細(xì)胞器燒灼，染色體切割、神經(jīng)元突起切除等一系列細(xì)胞外科于術(shù)。

光陷阱（opticnltr，p）技術(shù)是利用激光的力學(xué)效應(yīng)，將一個微米級大小的細(xì)胞器或其以村6鉗制于激光束的焦平面，也可稱為光鉗?？衫霉忏Q技術(shù)來移動拙胞的微小別粘和結(jié)構(gòu)（如染色體、細(xì)胞器）、進行細(xì)胞融合、機械刺激及細(xì)胞骨架彈性測址等。

3.熒光光漂白恢復(fù)（FR八P）技術(shù)：此技術(shù)借助于高強度脈沖式激光照射細(xì)胞的某一區(qū)域，從而造成該區(qū)域熒光分子的光淬火，該區(qū)域周圍州F淬滅熒光分子將以一定速率向受照區(qū)域擴散，用激光掃描共聚焦顯微鏡可邑接對此擴散速率進行監(jiān)測．由此揭示細(xì)胞結(jié)構(gòu)和各種變化的機制，因而可用以研究細(xì)胞骨架構(gòu)成、核膜結(jié)構(gòu)和大分子組裝等。

4．胞間通訊的研究：動物細(xì)胞中縫隙連接介導(dǎo)的胞間通訊被認(rèn)為在細(xì)胞增殖和分化中起著非常重要的作用。徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡通過測量細(xì)胞縫隙連接介導(dǎo)的分子轉(zhuǎn)移，觀察相鄰細(xì)胞之間的胞間通訊?？捎糜谘邢饶[瘤啟動因子、生長因子以及細(xì)胞內(nèi)物”、pH相cAMP對縫隙連接祁胞間通訊的影響。

5．細(xì)胞膜流動性測定：細(xì)胞膜熒光探針受到極化光線激發(fā)后，其發(fā)射光極性依賴于熒光分子的旋轉(zhuǎn)，而這種有序的運動自由度依賴于熒光分子周圍的膜流動性，故極性測員叮間接反映細(xì)胞膜的流動件。因此，通過計算機軟件，徠卡激光掃描共聚焦顯微鏡可對細(xì)胞膜的流動性進行定量和定性分析。這種膜流動件測定在膜的磷脂酸織成分析、藥物效應(yīng)和作用位點、溫度反應(yīng)測定及物種比較等方面有重要作用。

備注：徠卡共聚焦顯微鏡中細(xì)胞生物學(xué)功能部分文章由北京中儀光科科技有限公司編輯整理上傳。